斑马鱼对有机污染物的富集量有多大影响？

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在实验中，每组都采集了6尾斑马鱼，雌雄比例为1∶1。首先，我们取得了肝脏组织并进行了质量称量。接下来，将肝脏组织与4毫升乙腈和20纳克对三联苯-d14内标物一同置于容器中，然后进行了机械匀浆。冰浴超声处理进行了40分钟，之后进行了离心操作以收集上清液。残渣经过一次重复提取，将提取液合并后，进行旋转蒸发，直至容积减至2毫升。接着，将提取液转移到预先活化的SPE（BondElut-PPL，200毫克，3毫升）固相小柱中，使用4毫升乙腈和2毫升甲醇进行洗脱。洗脱物在温和氮气流中吹至近干，然后用500微升色谱纯正己烷进行重溶。最后，将样品转移到气质进样小瓶中，使用装载有HP-5MSUltraInert色谱柱的气相色谱-三重四级杆质谱仪进行TDCIPP含量测定。进样量为1微升，不分流模式，进样口温度为290℃。柱升温程序为：首先恒温50℃2分钟，然后以10℃/分钟升温至220℃并保持0.5分钟，最后以4℃/分钟升温至240℃并保持1.5分钟。传输线温度为300℃，离子源温度为230℃，四级杆温度为150℃。TDCIPP和对三联苯-d14的定性离子分别为75 m/z和224.2 m/z，定量离子分别为98.9、190.9、209和224.2 m/z。我们还进行了溶剂空白和肝脏空白样品的对照监测，以确保实验的准确性。肝脏样品中对三联苯-d14的回收率为(94.4±10.6)%，TDCIPP的方法检出限为0.37微克/千克。最终浓度计算方式是样品浓度与空白样品TDCIPP最高检测值之间的差值。

此外，我们还对斑马鱼的肝脏组织进行了病理学分析。首先，将新鲜的斑马鱼肝脏组织（雌雄比为1∶1）用PBS冲洗干净后，进行了固定处理。具体而言，将肝脏组织放入4%多聚甲醛中，以4摄氏度进行固定过夜。然后，通过酒精梯度脱水和二甲苯透明处理，将样品制作成超薄切片（4微米），随后进行了HE染色。倒置荧光显微镜用于观察肝脏组织的病理学损伤程度。每个处理组设置了3个平行样本。

另外，我们还对斑马鱼肝脏组织进行了氧化应激和炎症指标的测定。首先，每组取得了3份肝脏组织样品，加入预冷PBS后进行机械匀浆，然后进行离心，以测定ROS、SOD、GPx、GSH、MDA和总蛋白的含量，以评估肝脏氧化应激情况。此外，每组还取得了3份肝脏组织样本，进行了组织匀浆和ELISA试剂盒反应，以测定TNF-α和IL-6的绝对浓度，以评估肝脏炎症水平。

最后，我们使用GC-MS/MS进行了非靶向代谢物组学分析，以鉴定污染胁迫下斑马鱼肝脏内源代谢物含量的变化。每组收集了50毫克斑马鱼肝脏新鲜组织，进行了液氮快速冷冻，然后加入了预冷的甲醇/氯仿/水混合提取液进行样品处理。随后进行了两步的衍生化处理，最终通过GC-MS/MS进行检测和分析。根据数据采集结果，使用PCA进行多元统计分析，通过主成分分析（PCA）来揭示处理组与空白组之间代谢物的差异。

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